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酵母菌高效破壁方法的革新

——终极研磨手段:冷冻研磨法

2017/3/22 11:33:49

    酵母菌是基因表达研究和重组蛋白生产的通用宿主。然而,传统酶解法进行酵母mRNA和内容蛋白提取通常非常困难。我们以细胞总RNA提取为例,对各种酵母破壁方法进行比较。我们用不同的方法对酵母菌破壁,然后用Trizol试剂进行RNA的提取,最后进行电泳检测,发现不同破壁方法效果如下:

 

SPEX公司Freezer/Mill冷冻研磨仪将上述液氮研磨法进一步改良,使酵母破壁这样的实验更加简单,无人值守即可完成。将样品装入密闭的研磨容器,浸入液氮,采用电磁振荡技术,电磁往复驱动钢制撞子,振荡装机样品,动能惯性更大,实现高动能撞子大面积撞击,快速粉碎研磨。过程中,样品始终处于液氮温度(-196°C)。

 

实验方法:

第一步:将样品研磨罐预冷冻。

第二步:将酵母菌液加入液氮中,控制速度,使菌液进入液氮中后形成小颗粒。将菌体液氮颗粒转入研磨罐中。放入冷冻研磨仪的样品仓。

第三步:设置研磨程序,预冷10-15min,研磨2min15个循环,两次研磨之间间歇1min

 

实验结果:

经检验,用此法能使得90%以上的酵母细胞破壁。酵母的RNA和细胞内蛋白保持高活性。