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从分析型HPLC数据校正生成ACCQ Prep制备色谱聚焦梯度

从分析型HPLC数据校正生成ACCQ Prep制备色谱聚焦梯度

2021/04/30 09:23
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摘要

在分析方法考察过程中,化学家经常评估纯化过程化合物在不同色谱柱下的化学特性,例如,对于手性化合物的纯化,通常在高效液相色谱分析中筛选几种类型的色谱柱,尽管不同类型的色谱柱,有着很大的化学差异性,尽管ACCQ Prep制备色谱系统上可以安装、使用各种类型色谱柱,ACCQ Prep可以通过只需对一种类型的色谱柱单次校准计算出聚焦梯度,该校准不局限于单个色谱柱,通用校准也可以用于不同化学特性的色谱柱,只要分析型色谱柱有相同的尺寸和使用相同的梯度和流速,就允许快速和简便的色谱方法筛选。

 

 

背景

 
 
许多实验室,例如那些进行手性物质纯化的实验室,使用多种类型的色谱柱和溶剂进行方法开发,一般从对保留时间和分离度的初步评估开始,然后,侦测运行可以用来创建ACCQ Prep聚焦梯度的高效液相色谱制备方法,色谱柱安装后,ACCQ Prep制备型HPLC的PeakTrak®软件具有内置校准、计算侦测方法,这种内置校准的工作适用于所有色谱柱,无论色谱柱的制造商。ACCQPrep外部HPLC校准同样可以用于各种类型色谱柱,只要分析柱的尺寸相同,并且使用相同的梯度。

 

 
 

实验和结果

 
 

C18色谱柱运行与C8色谱柱校准

通用测试混合物(PN 60-5234-835)在RediSep® C8制备色谱柱(20x150mm,5µ,200Å,PN 69-2203-858)上运行,使用甲醇/水溶剂系统,得到第一个保留时间在6min的洗脱峰,如在Teledyne ISCO 网站Technical Note 52 (TN52)所述的《校准分析型HPLC系统》。

 

相匹配的C8 UHPLC色谱柱(2x50 mm, PN 69-2203- 853)在水/甲醇体系中运行(5min 5 - 100% B,在100%甲醇下等度保持2.5min),峰洗脱时间为3.757min,对应于ACCQPrep上的峰洗脱时间为6min。

 

制备色谱运行

C8分析柱更换为RediSep Prep UHPLC C18分析柱(2x50 mm, PN 69-2203-854),测试混合物在水/甲醇梯度中运行,梯度与C8柱相同。正如预期的那样,由于C18色谱柱填料100Å孔径使得保留增加,化合物在梯度中较晚被洗脱。

使用C18分析运行的数据计算图2中的制备型梯度,同时使用图1中的C8色谱柱的校准。制备纯化是采用RediSep Prep C18柱(20x150 mm, 5µ,100Å, PN 69-2203-810)。两种情况下,化合物洗脱时间都接近预期的6分钟洗脱时间。

同时在C8制备型高效液相色谱柱上运行测试混合物,并进行C8校准;利用图1中的分析数据计算第2洗脱峰在4.451min时的梯度。

 

色谱图看起来与C18柱几乎相同,唯一的区别是由于两色谱柱之间的保留差异聚焦梯度开始和结束的溶剂组成不同。

 

硅胶色谱柱运行与C18校准

4.6 × 150 mmRediSep Prep C18柱在AgilentHPLC分析系统上进行校正,如TN52中所述,梯度6min内从5到100%甲醇,然后以1.0mL/min的流速100%甲醇保持6min。溶剂改为正己烷/乙酸乙酯,色谱柱改为4.6 × 150 mm RediSep Prep硅胶柱。同样的梯度法用于新溶剂体系和色谱柱,梯度6min内5至100%乙酸乙酯,将methyl paraben样品注入,在20x150mm的RediSep Prep硅胶柱上,在正己烷/乙酸乙酯中进行聚焦梯度的保留时间如图4所示,样品在计算梯度的中间附近被洗脱。

 

 
 

结论

 
 

在PeakTrak聚焦梯度生成中,对于某类化学特性的色谱柱校准可用于另一类化学特性的色谱柱,这允许在选择分析、制备系统色谱柱的更多灵活性,并确保适当的可扩展性。

遵循一个简单的规则,在使用外部HPLC分析柱的长度和内径尺寸相同情况下,然后运行具有相同的梯度和流量。这允许用户使用分析型HPLC侦测运行不同的色谱柱和溶剂系统,以确定具有较高样品承载能力的最佳净化方法。


 

ACCQ Prep HP150 高压制备型HPLC色谱系统

 
 
 

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